Шановні колеги! Науковий семінар «Актуальні проблеми сучасної біохімії» Інституту біохімії ім. О.В.Палладіна НАН України продовжує свою роботу. 3-го червня (вівторок) о 10-30 в Актовій залі Інституту будемо слухати доповідь наукового співробітника відділу хімії та біохімії ферментів ІБХ НАНУ к.б.н. Тихомирова А.О. за темою «Нові уявлення про механізми регуляції плазміноген/плазміновою системою функціонального стану тромбоцитів». Традиційно до цього інформаційного листа додаємо авторські тези доповіді. Запрошуємо Вас та Ваших колег до участі в роботі нашого семінару. З повагою – С.О.Костерін.
Тези доповіді на науковому семінарі Інституту біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України
наукового співробітника відділу хімії та біохімії ферментів
к.б.н. Тихомирова А.О. за темою
«Нові уявлення про механізми регуляції плазміноген/плазміновою системою
функціонального стану тромбоцитів»
(науковий керівник – зав. відділу хімії та біохімії ферментів, д.б.н. Гриненко Т.В.)
Вступ. Плазміноген/плазмінова (Pg/Pm) система відіграє ключову роль в деградації фібринових згустків і залучається до регуляції функціонального стану клітин. Доведена участь системи Pg/Pm у ремоделюванні тканин, ангіогенезі, запальних процесах, інвазії пухлинних клітин тощо. Крингл-вмісні фрагменти Pg/Pm (ангіостатини, As) виконують самостійні специфічні функції та проявляють антиангіогенні, антиадгезивні та протизапальні властивості. As інгібують міграцію моноцитів/макрофагів, руйнуючи їх актиновий цитоскелет. Відомо, що тромбоцити здатні зв’язувати Pg та утворювати As на поверхні плазматичної мембрани. Нами встановлено, що частково деградована форма Pg (Lys-Pg) пригнічує агоніст-індуковану агрегацію тромбоцитів людини, однак молекулярні механізми дії Lys-Pg залишаються не з’ясованими. Тромбоцити беруть участь у гемостатичних та репаративних процесах, тому дослідження молекулярних механізмів регуляції системою Pg/Pm функціонального стану тромбоцитів та генерації ними As є важливими науково-практичними задачами.
Мета. Визначення залучення актину до механізмів анти-агрегативної дії Lys-Pg та утворення As тромбоцитами.
Методи. Оптична агрегометрія, гель-електрофорез, імуноблотинг, протокова цитофлуориметрія, конфокальна лазерна скануюча мікроскопія, хроматографія (афінна хроматографія, гель-фільтрація), імуноензимний аналіз.
Результати. Встановлено, що Lys-Pg інгібує індуковану тромбіном та колагеном реконструкцію актинового цитоскелету тромбоцитів, яка є необхідною умовою їх агрегації та адгезії. На відміну від Lys-форми, Glu-Pg не пригнічує агоніст-індуковану агрегацію тромбоцитів і не впливає на реорганізацію їх актинового цитоскелету. Одним з механізмів дії Lys-Pg на тромбоцитарний цитоскелет може бути безпосереднє зв’язування даного протеїну з актином, презентованим на поверхні плазматичної мембрани активованих тромбоцитів. З використанням протокової цитофлуориметрії та конфокальної мікроскопії нами було підтверджено експонування актину на поверхні тромбоцитів в ході їх активації. Вперше показано, що антитіла проти актину істотно зменшують кількість зв’язаного з поверхнею активованих тромбоцитів FITC-похідного Pg. Новими даними є те, що за присутності антитіл проти актину спостерігається інгібування утворення фрагментів Pg на мембранах активованих тромбоцитів. Отримані результати вказують на можливу роль актину в якості одного із сайтів зв’язування Pg плазматичною мембраною тромбоцитів та його участь у фрагментації зимогену з утворенням As. Отримані результати щодо молекулярного механізму антиагрегативного ефекту Pg і генерації As тромбоцитами за участі поверхневого актину можуть бути корисними для пошуку нових засобів модулювання активності тромбоцитів за патологічних станів, асоційованих як з тромботичними ускладненнями, так і з порушенням ангіогенного балансу (онкогенезі, ішемічній хворобі серця, діабетичних ускладненнях тощо).
Висновки. Представлені дані вказують на роль системи Pg/Pm у регуляції клітинної ланки гемостазу за участі тромбоцитів. Антиагрегативний ефект Lys-Pg реалізується через інгібування перебудови актинового цитоскелету тромбоцитів. Актин, що експонується на поверхні плазматичної мембрани в ході активації тромбоцитів, бере участь у зв’язуванні Pg та утворенні As.