GoogleTranslate

Ukrainian Chinese (Traditional) English French German Italian Latvian Lithuanian Polish Spanish
 

Шановні колеги, вітаю Вас! Науковий семінар Інституту біохімії ім. О.В.Палладіна НАН України «Актуальні питання сучасної біохімії» продовжує свою роботу. 29-го вересня (вівторок) в Актовій залі о 10-30 будемо слухати доповідь м.н.с. лабораторії генетики мікроорганізмів ННЦ «ІЕКВМ» Зленко Оксани Борисівни «Лабораторна діагностика туляремії (імуноферментний аналіз та полімеразна ланцюгова реакція), епізоотологічний моніторинг і генотипування збудника».

Доповідь буде зроблено за матеріалами кандидатської дисертації, яку планується подати до захисту до Спецради Інституту біохімії ім. О.В.Палладіна.

Як завжди, до цього листа додаються авторські тези доповіді.

Запрошуємо Вас та Ваших колег до участі у роботі нашого семінару.

Увага! Участь у роботі семінару можлива виключно за умов користування захисними масками та взаємодистанційного перебування слухачів  в залі. Дякуємо за розуміння!

З повагою – С.О.Костерін.

 

 

Лабораторна діагностика туляремії (імуноферментний аналіз та полімеразна ланцюгова реакція), епізоотологічний моніторинг і генотипування збудника

Доповідач: м.н.с. лабораторії генетики мікроорганізмів ННЦ «ІЕКВМ» Зленко Оксана Борисівна. E-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам необхідно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

Туляремія - це зоонозна інфекція, що викликається грам-негативною бактерією Francisella tularensis і є ендемічною в Україні та більшості європейських країн. Природні вогнища туляремії є стійкими, вони можуть існувати століттями, проявляючись періодичними спалахами захворювань серед гризунів і епідеміями серед людей.

Зважаючи на те, що наразі бракує вітчизняних тест-систем для ідентифікації збудника туляремії, розробка та вдосконалення методів діагностики на основі ПЛР та ІФА є перспективним напрямом досліджень.

Метою роботи є розробка і вдосконалення засобів діагностики туляремії на основі ПЛР та ІФА, проведення молекулярно-генетичного скринінгу і серомоніторингу щодо поширення туляремії, а також аналіз генетичних маркерів мінливості ізолятів F.tularensis, виділених на території України.

Для досягнення мети були поставлені такі завдання:

- сконструювати і отримати рекомбінантні антигени на основі білків GroEl, SucB та FTT0975 для ідентифікації антитіл до збудника туляремії методом ІФА.

- сконструювати і отримати рекомбінантний позитивний контроль гена tul4 F. tularensis для діагностики збудника туляремії методом ПЛР у реальному часі.

- дослідити епізоотологічну ситуацію з туляремії на території України молекулярно-генетичними і серологічними методами.

- проаналізувати генетичні маркери мінливості культур F. tularensis, виділених на території України у 1996-2016 рр.

Методи дослідження: Робота виконана з використанням молекулярно-генетичних (ПЛР, MLVA-типування, секвенування), біотехнологічних (генна інженерія, хроматографія, культивування гібридом), серологічних (ІФА, вестерн-блотинг), філогенетичних (MLVA-типування і кластеризація), біоінформатичних, у т.ч. математико-статистичних методів досліджень (аналіз нуклеотидних послідовностей, аналіз відповідностей, метод невиваженого попарного середнього, стандартне відхилення, коефіцієнт варіативності).

Результати:

  • отримано три рекомбінантні протеїни F.tularensis (GroEl, FTT0975, SucB), підтверджено ефективність використання протеїнів GroEl і SucB у якості антигенів в ІФА з виявлення антитіл проти збудника туляремії у сироватках крові від свиней (чутливість обох методів становила 100%, специфічність 75,5% для ІФА з антигеном SucB і 75% для ІФА з антигеном GroEl). Підтверджено антигенні властивості трьох протеїнів при дослідженні сироваток від людини. Оптимізовано параметри проведення ІФА.
  • сконструйований позитивний контрольний зразок на основі плазмідного вектору pTZ57F_R_FTFP зі вставкою гена tul4 F.tularensis. Доведена можливість його використання плазміди при виявленні генетичного матеріалу збудника туляремії методом ПЛР та ПЛР у реальному часі з аналітичною чутливістю реакції одна копія в мікролітрі (п’ять копій на реакцію).
  • за результатами молекулярно-генетичного скринінгу зразків польового матеріалу щодо наявності ДНК збудника туляремії встановлено, що в Харківській обл. 23% відібраних зразків були позитивними, у Дніпропетровській обл. - 1,9%, у Миколаївській обл. - 0,4%. Всього було зібрано 216 зразків кліщів, 736 зразків від гризунів, 25 пелет, 2 зразки сіна, 7 зразків води. За результатами аналізу відповідностей, збудник туляремії найчастіше виявляли у кліщів D. reticulatus та I. ricinus (Ixodidae) (74,2% і 29,3% відповідно).
  • за результатами моніторингу диких кабанів України щодо туляремії, виявлено 12,3 % серопозитивних тварин з 701 досліджених. Найбільше позитивних зразків виявлено у Чернівецькій (33,9%) та Хмельницькій (30,6%) обл.
  • за результатами MLVA-типування 20 ізолятів F. tularensis, встановлено, що всі вони належать до голарктичного підтипу. Було виявлено підтип, що циркулює на всій території України впродовж 10 років, до нього належало 14 ізолятів. Один ізолят, споріднений зі зразками з території колишньої Чехословаччини, був виділений із сіна на території Чернігівської обл. та, ймовірно, був випадково завезений до країни.

Положення на захист:

  • технологія отримання рекомбінантних антигенів на основі протеїнів SucB, GroEl, FTT Результати випробування отриманих протеїнів при проведенні серологічних досліджень (ІФА, вестерн-блотинг) при дослідженні сироваток крові від свиней та людини.
  • результати серомоніторингу та молекулярно-генетичного скринінгу польових зразків, зібраних на території України, щодо збудника туляремії
  • результати MLVA-генотипування українських ізолятів F.tularensis за 12 локусами.