Шановні колеги! Науковий семінар Інституту біохімії ім. О.В.Палладіна НАН України «Актуальні проблеми сучасної біохімії» продовжує свою роботу. 19 червня (вівторок) 2012 р. о 10-30 в Актовій залі Інституту будемо слухати доповідь к.б.н. Олександра Koрчинського «СУЧАСНІ МЕТОДИ ДОСТАВКИ ТА ЕКСПРЕСІЇ ГЕНІВ В КЛІТИНАХ ЕВКАРІОТІВ» (Інститут біології клітини НАН України, Львів). Авторські тези доповіді додаються. Ми будемо раді зустрітися з Вами та Вашими колегами на засіданні нашого семінару. З повагою – С.О.Костерін.
СУЧАСНІ МЕТОДИ ДОСТАВКИ ТА ЕКСПРЕСІЇ ГЕНІВ В КЛІТИНАХ ЕВКАРІОТІВ
Олександр Koрчинський
Інститут біології клітини НАН України, Львів, Україна.
Електронна пошта:
Культура тканин широко використовується в якості зручного методу сучасної молекулярної біології та створення лікарських препаратів. В усьому світі використовуються множинні лінії клітин, отриманих з нормальних і пухлинних тканин. Тим не менш, всі існуючі клітинні лінії, у тому числі псевдонормальні, є принаймні мінімально трансформованими і часто не можуть належним чином відтворювати ситуацію в природних умовах. Багато з цих обмежень можна обійти за допомогою первинних клітин. На жаль, ці клітини часто погано піддаються трансфекції. В різних лабораторіях було охарактеризовано використання ауто-інактивованих лентивірусів третьої генерації та E1/E3-дефіцитних рекомбінантних аденовірусних векторів (рAдв) в якості високо ефективних інструментів доставки та експресії генів, які в умовах in vivo дозволяють успішно працювати з різними типами клітин, що погано піддаються трансфекції. Генерування рекомбінантних аденовірусних конструкцій включає в себе субклонування вставки до зручної рестрикційної ділянки човникового вектора з наступною гомологічною рекомбінацією отриманого вектора з основною частиною аденовірусного геному. Не та співавт. (1998) розробили спрощену AdEasy систему, яка дозволяє здійснення гомологічної рекомбінації в бактеріях та створення рAдв протягом менш ніж одного місяця. В даній роботі ми описуємо створення за допомогою AdEasy системи більше ніж 80 нових рAдв, зокрема експресійних, люциферазних репортерних систем і векторів, що містять малі інтерферуючі шпилькові РНК. Створені рAдв можуть бути використаними в багатьох біологічних системах і в поєднанні з належною процедурою підтримання культури дозволяють досягнення 100% ефективності трансдукції клітин, що погано піддаються трансфекції, зокрема первинних кератиноцитів миші, первинних мезенхімних стовбурових клітин кісткового мозку людини, та інших типів первинних клітин ссавців.