УДК 577(112+354.9)+57(085.2+086.164)+ 616-006.6
Н. В. КОРОТКЕВИЧ, А. М. ГОНЧАРЕНКО, А. Ю. ЛАБИНЦЕВ
ОТРИМАННЯ РЕКОМБІНАНТНОЇ РОЗЧИННОЇ ФОРМИ HB-EGF ЛЮДИНИ ТА ЙОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНИХ ПОХІДНИХ ТА ПЕРСПЕКТИВИ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ
Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України, м. Київ;
Гепаринзвязувальний подібний до епідермального фактору росту фактор росту – HB-EGF (від англ.: Heparin-Binding Epidermal growth factor-like Growth Factor), є представником родини епідермальних ростових факторів, який синтезується у вигляді мембрано-заякореного попередника pro-HB-EGF, здатного утворювати розчинну форму фактору (sHB-EGF) при дії на нього металопротеїназ типу ADAM. Рецепторами для sHB-EGF є гомодимери рецепторів родини епідермальних ростових факторів першого (HER-1, Human Epidermal growth factor Receptor) та четвертого типу (HER-4), а також їх гетеродимери із HER-2 та HER-3. Зв’язування sHB-EGF з рецептором призводить до активації сигнальних шляхів MAPК та PI-3K, які відіграють вирішальну роль у регулюванні проліферації клітин та інгібуванні апоптозу, що є особливо важливим при злоякісних перетвореннях.
Високий рівень експресії рецепторів родини HER було виявлено на клітинах багатьох типів пухлин епітеліального походження, що може свідчити про їх важливу роль у патогенезі пухлин цього типу. Тому оцінка експресії рецепторів родини HER на клітинах може виявитись важливою для діагностики їх злоякісної трансформації та вибору оптимального шляху протиракової терапії.
Метою цієї роботи було отримати рекомбінантний sHB-EGF та флуоресцентні похідні на основі його повнорозмірної та вкороченої форми (без гепарин-зв’язувальної ділянки) і посиленого зеленого флуоресцентного білка (ЕGFP), а також перевірити можливість використання отриманих похідних для оцінки експресії рецепторів родини HER (а саме HER-1 та HER-4) на різних типах клітин.
В результаті проведеної роботи було отримано рекомбінантий sHB-EGF людини та його флуоресцентні похідні, а також оптимізовано умови їх виділення та очистки. Попередні дослідження біологічної активності рекомбінантного sHB-EGF підтвердили його здатність стимулювати проліферацію та міграцію фібробластів. За допомогою методів конфокальної мікроскопії та проточної цитофлуориметрії було підтверджено здатність отриманих флуоресцентних похідних взаємодіяти із поверхнею клітин.
Отже, отриманий рекомбінантний білок sHB-EGF та його флуоресцентні похідні можуть бути використані для дослідження механізмів реалізації біологічної активності HB-EGF, його участі у процесах диференціації та міграції, а також для оцінки експресії рецепторів HER на клітинах з метою виявлення їх злоякісної трансформації.