УДК 577. 112
Л. П. УРВАНТ, Є. М. МАКОГОНЕНКО, Е. В. ЛУГОВСЬКОЙ
ВІДЩЕПЛЕННЯ ФІБРИНОПЕПТИДУ А ВІД ФІБРИНОГЕНУ ТРОМБІНОМ/РЕПТИЛАЗОЮ СПРИЧИНЯЄ СТРУКТУРНІ ЗМІНИ В В?121-134 ДІЛЯНЦІ МОНОМЕРНОГО ФІБРИНУ
Інститут біохімії ім. О.В.Палладіна НАН України, Київ;
Фібриноген (Fg) – мультидоменний багатофункціональний білок, що формує фібриновий згусток. В нормі Fg інертний і не взаємодіє з іншими білками в плазмі крові. Його ділянки міжмолекулярної взаємодії приховані фібринопептидами А і В та інтрамолекулярними взаємодіями з ?С доменами. Вважалося, що відщеплення фібринопептиду А (FрА), що призводить до появи А центру полімеризації (Gly-Pro-Arg) в N-кінці А?-ланцюга, – це основна зміна в структурі мономерного Fg. Інші структурні зміни відбуваються при полімеризації фібрину. Однак, у відділі структури і функції білка ІБХ НАНУ (E.V.Lugovskoy et al, 2008) було знайдено неоантигенну детермінанту фібринспецифічних монАТ І-3с, яка була локалізована в суперспіральній ділянці В?118-134 ?-ланцюга фібриногену, експонувалась на ранніх етапах полімеризації фібрину і в межах якої знаходився сайт латеральної асоціації протофібрил фібрину. Нашою метою було визначити які зміни в Fg і на якому етапі полімеризації фібрину призводять до експонування неоантигенної детермінанти і сайту латеральної асоціації протофібрил фібрину В?121-134.
Було висловлено припущення, що неоантигенна детермінанта експонується після відходження ?С домену від центральної частини Fg. Проведені кінетичні дослідження експозиції неоантигенної детермінанти за допомогою ELISA та паралельно структурних змін в Fg та його Х-фрагментах за допомогою електрофорезу в ПААГ показали, що при відщепленні тромбіном (анцистрономН) FрА неоантигенна детермінанта експонується однаково як в Fg, так і в його Х-фрагментах. Гідроліз фібриногену плазміном, що відщеплює ?С домени, не призводить до експозиції неоантигенної детермінанти, що свідчить про те, що неоантигенна детермінанта і, відповідно, сайт латеральної асоціації В?121-134 не передіснують в Fg і ?С домен не екранує неоантигенну детермінанту в Fg.
Для того, щоб встановити чи експонується неоантигенна детермінанта на мономерному чи полімерному фібрині, ми дослідили, використавши метод ППР, зв’язування дезАфібрину, що утворювався в системі Fg +анцистронН in situ, з імобілізованими на імуносенсорний чіп монАТ І-3с. При порівнянні зв’язування дезАфібрину за присутності 1mM GPRP та його відсутністю, різниці у зв’язуванні не спостерігали, тобто неоантигенна детермінанта (сайт латеральної асоціації) формується на мономерному фібрині. Отже, ми знайшли, що одночасно з появою А центру первинної полімеризації на молекулі мономерного дезАфібрину формується сайт латеральної асоціації протофібрил.