А. П. ФЕДОСЕЄНКО , Н.В. БИЦЬ, О.В. КОЛЄГАЄВ, А.А. САМОЙЛЕНКО, Л.Б. ДРОБОТ
ВКЛАД НАДЕКСПРЕСІЇ АДАПТЕРНОГО ПРОТЕЇНУ RUK/CIN85 ДО МЕХАНІЗМІВ, АСОЦІЙОВАНИХ З ПІДТРИМАННЯМ ФЕНОТИПУ РАКОВИХ СТОВБУРОВИХ КЛІТИН
Інститут біохімії ім. О.В.Палладіна НАН України, Київ;
Вступ: Ракові стовбурові клітини (CSCs) - це пухлинні клітини, які здатні до самооновлення і утворення нових гетерогенних пухлин. Відомо, що до виникнення і підтримання фенотипу CSCs залучені такі механізми, як NF-?B сигналювання, надекспресія мембранних транспортерів та експресія специфічних поверхневих маркерів. Однак, на сьогодні в літературі повністю відсутні дані стосовно ролі адаптерних протеїнів у регулюванні біологічних відповідей CSCs. Відомо, що адаптерний протеїн Ruk/CIN85 виконує важливу роль не тільки у підтриманні гомеостазу нормальних клітин, але може бути також залученим до регуляції шляхів злоякісної трансформації клітин людини і тварин і, як наслідок, слугувати молекулярним маркером канцерогенезу та, в перспективі, представляти привабливу мішень для антипухлинної терапії. Метою даної роботи було з’ясувати роль адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у механізмах, що визначають підтримання фенотипу ракових стовбурових клітин.
Методи: Досліди проводили на клітинах аденокарциноми молочної залози людини лінії MCF-7 дикого типу та зі стабільною надекспресією адаптерного протеїну Ruk/CIN85. Прикріплені та суспензійні клітини аналізували на здатність виключати барвник толуїдиновий блакитний, як описано в роботі (Сіосе et al., 2010). Активацію транскрипційного фактора NF-?B в досліджуваних клітинах аналізували за допомогою репортерної конструкції з геном люциферази. Сфероїди отримували шляхом культивування клітин на низькоадгезивному пластику у детермінованому середовищі. Виділені субпопуляції CSCs-подібних клітин аналізували на наявність поверхневого маркеру CD44 за допомогою імуноблот-аналізу.
Результати: Було проаналізовано прикріплені та суспензійні клітини MCF-7 із стабільною надекспресією Rukl/CIN85 на здатність виключати барвник толуїдиновий блакитний. Встановлено, що суспензійні, але не адгерентні клітини містять високий процент клітин, що виключають барвник, причому їх кількість позитивно корелює з рівнем експресії Rukl/CIN85. Показано, що суспензійні клітини в культурі субліній MCF-7 з надекспресією Ruk/CIN85 здатні до ефективного формування сфероїдів при культивуванні в детермінованому середовищі на низькоадгезивному пластику. Продемонстровано, що в клітинах з надекспресією Ruk/CIN85, на відміну від контрольних клітин, спостерігається активація транскрипційного фактору NF-?B, що відповідає даним, отриманим іншими авторами для CSCs. Імуноблот-аналізом показано, що рівень експресії поверхневого маркеру CD44 позитивно корелює з рівнем експресії Rukl/CIN85.
Висновки: Отримані дані свідчать про потенційну регуляторну роль адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у розвитку фенотипу, характерного для CSCs.